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應(yīng)用案例
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高產(chǎn)輔酶 Q10 類球紅細(xì)菌的選育及發(fā)酵優(yōu)化

來源:   作者: 發(fā)布日期:2022-05-18 訪問量:3582

本期為您推薦江南大學(xué)周景文教授研究團隊發(fā)表在知名期刊《食品與發(fā)酵工業(yè)》上的一篇文章:高產(chǎn)輔酶 Q10 類球紅細(xì)菌的選育及發(fā)酵優(yōu)化。


文章摘要內(nèi)容如下:

輔酶 Q10(coenzyme Q10,CoQ10)是一種淡黃色的脂溶性醌類,常見于動植物和微生物的細(xì)胞內(nèi)膜中,是天然的抗氧化劑和細(xì)胞代謝激活劑,其生產(chǎn)方法主要是發(fā)酵法。類球紅細(xì)菌是一種古老的原核生物,廣泛存在于農(nóng)田、池塘、湖泊和海洋中,可以利用多種小分子有機物為碳源合成增值產(chǎn)品,如微生物蛋白、類胡蘿卜素、細(xì)菌葉綠素、輔酶 Q10 和長鏈游離脂肪酸等,國內(nèi)輔酶 Q10 的生產(chǎn)效率并不能滿足當(dāng)前我國日益增長的需求,國內(nèi)外研究多采用誘變育種和發(fā)酵過程優(yōu)化來強化輔酶 Q10 的生產(chǎn)。常壓室溫等離子體(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)技術(shù)因其高突變率、低危險性及操作便利性等優(yōu)勢在國內(nèi)誘變研究工作中獲得了更多青睞,如維生素 K、吡咯喹啉醌和輔酶等重要物質(zhì)高產(chǎn)菌株的篩選研究進(jìn)展迅速。

該研究以一株具有 CoQ10 生產(chǎn)能力的類球紅細(xì)菌為出發(fā)菌株,其在搖瓶水平上初始 CoQ10 產(chǎn)量為 136.47 mg/L。通過常壓室溫等離子體誘變和多孔板高通量篩選相結(jié)合的方法,確定了ARTP 誘變處理的時間為 120 s,致死率為 90%。在孔板初篩階段從 5184 株菌的突變菌庫通過高通量篩選方法獲得 8 株高產(chǎn)菌株,經(jīng)過復(fù)篩得到一株 CoQ10 的高產(chǎn)突變菌株 7P22,其搖瓶水平CoQ10 產(chǎn)量達(dá)到 158.44 mg/L,相比出發(fā)菌株提高了 16.1%。驗證其遺傳穩(wěn)定性后,進(jìn)一步優(yōu)化了碳源、前體物質(zhì)、金屬離子等,提高了輔酶 Q10 的產(chǎn)量。最后,在 5 L 發(fā)酵罐上對突變菌株進(jìn)行培養(yǎng)條件的優(yōu)化,CoQ10 產(chǎn)量提高至 1 640.6 mg/L。該研究所使用的結(jié)合篩選因子和 Craven test 檢測法的高通量篩選方法可以實現(xiàn)簡單、高效地獲得高產(chǎn) CoQ10 突變菌株。

 

文章精彩內(nèi)容如下:

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文章摘要內(nèi)容如下:

輔酶 Q10(coenzyme Q10,CoQ10)是一種淡黃色的脂溶性醌類,常見于動植物和微生物的細(xì)胞內(nèi)膜中,是天然的抗氧化劑和細(xì)胞代謝激活劑,其生產(chǎn)方法主要是發(fā)酵法。類球紅細(xì)菌是一種古老的原核生物,廣泛存在于農(nóng)田、池塘、湖泊和海洋中,可以利用多種小分子有機物為碳源合成增值產(chǎn)品,如微生物蛋白、類胡蘿卜素、細(xì)菌葉綠素、輔酶 Q10 和長鏈游離脂肪酸等,國內(nèi)輔酶 Q10 的生產(chǎn)效率并不能滿足當(dāng)前我國日益增長的需求,國內(nèi)外研究多采用誘變育種和發(fā)酵過程優(yōu)化來強化輔酶 Q10 的生產(chǎn)。常壓室溫等離子體(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)技術(shù)因其高突變率、低危險性及操作便利性等優(yōu)勢在國內(nèi)誘變研究工作中獲得了更多青睞,如維生素 K、吡咯喹啉醌和輔酶等重要物質(zhì)高產(chǎn)菌株的篩選研究進(jìn)展迅速。

該研究以一株具有 CoQ10 生產(chǎn)能力的類球紅細(xì)菌為出發(fā)菌株,其在搖瓶水平上初始 CoQ10 產(chǎn)量為 136.47 mg/L。通過常壓室溫等離子體誘變和多孔板高通量篩選相結(jié)合的方法,確定了ARTP 誘變處理的時間為 120 s,致死率為 90%。在孔板初篩階段從 5184 株菌的突變菌庫通過高通量篩選方法獲得 8 株高產(chǎn)菌株,經(jīng)過復(fù)篩得到一株 CoQ10 的高產(chǎn)突變菌株 7P22,其搖瓶水平CoQ10 產(chǎn)量達(dá)到 158.44 mg/L,相比出發(fā)菌株提高了 16.1%。驗證其遺傳穩(wěn)定性后,進(jìn)一步優(yōu)化了碳源、前體物質(zhì)、金屬離子等,提高了輔酶 Q10 的產(chǎn)量。最后,在 5 L 發(fā)酵罐上對突變菌株進(jìn)行培養(yǎng)條件的優(yōu)化,CoQ10 產(chǎn)量提高至 1 640.6 mg/L。該研究所使用的結(jié)合篩選因子和 Craven test 檢測法的高通量篩選方法可以實現(xiàn)簡單、高效地獲得高產(chǎn) CoQ10 突變菌株。

 

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